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Video: Wie fügt man ein Gen in ein Plasmid ein?
2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2024-01-18 08:14
Die grundlegenden Schritte sind:
- Schneide die auf Plasmid und "einfügen" in die Gen . Dieser Prozess beruht auf Restriktionsenzymen (die DNA schneiden) und DNA-Ligase (die DNA verbindet).
- Einfügung das Plasmid in Bakterien.
- Wachsen Sie viel auf Plasmid - tragende Bakterien und verwenden sie als "Fabriken", um das Protein herzustellen.
Wie kann ein Gen in ein Plasmid GCSE eingefügt werden?
es ist in ein Plasmid eingefügt unter Verwendung von Ligasenenzymen. das Plasmid geht hinein eine Bakterienzelle. das transgene Bakterium vermehrt sich, was zu in Millionen identischer Bakterien, die Humaninsulin produzieren.
Außerdem, wie subkloniert man ein Gen? Grundlegende Schritte für Subklonen Sie setzen Ihr Insert aus dem Elternvektor frei und reinigen es, ligieren dieses Insert in einen vorbereiteten Zielvektor, transformieren diese Ligationsreaktion in kompetente Bakterienzellen. Dann screenen Sie die transformierten Zellen auf das Insert.
Wenn man dies berücksichtigt, was sind die 4 Schritte der Genklonierung?
Bei den klassischen Protokollen zur Restriktionsenzymverdauung und Ligationsklonierung umfasst die Klonierung eines DNA-Fragments im Wesentlichen vier Schritte:
- Isolierung der interessierenden DNA (oder Ziel-DNA),
- Ligatur,
- Transfektion (oder Transformation) und.
- ein Screening-/Auswahlverfahren.
Wie amplifiziert man ein Plasmid?
Versuchsdurchführung
- Führen Sie eine PCR durch und reinigen Sie das PCR-Produkt: Führen Sie eine PCR aus, um Ihre Insert-DNA zu amplifizieren.
- Verdaue deine DNA:
- Isolieren Sie Ihr Insert und Ihren Vektor durch Gelreinigung:
- Ligieren Sie Ihre Einfügung in Ihren Vektor:
- Transformation:
- Isolieren Sie das fertige Plasmid:
- Überprüfen Sie Ihr Plasmid durch Sequenzierung:
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