Video: Können Sie ein PCR-Produkt sequenzieren?
2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2023-12-16 00:12
Direkte Sequenzierung von PCR-Produkte . Es ist durchaus möglich, direkt Reihenfolge ein PCR-Produkt ohne vorher das Fragment zu klonen. Direkte PCR-Sequenzierung ist selten erfolgreich, es sei denn Sie verbringen Sie einige Zeit, um sicherzustellen, dass Sie fallen nicht hinein einer der vielen Fallen.
Was ist auf diese Weise eine Sequenzierung von PCR?
Direkte Sequenzierung von PCR Produkte. Sie müssen alle entfernen PCR Primer und nicht eingebaute Nukleotide, bevor das Produkt sequenziert . Sequenzierung verwendet nur einen Primer anstelle der beiden in PCR . Wenn Sie nicht beide Primer entfernen, erhalten Sie zwei Sequenzen überlagert, die nicht lesbar sind.
Kann ich auch PCR-Primer für die Sequenzierung verwenden? PCR-Primer sind bestimmt für PCR Amplifikation, um ein Amplikon zu erhalten. Sequenzierprimer sind Gebraucht zu Reihenfolge ein DNA-Fragment und enthüllen seine DNA Reihenfolge identifizieren. 4. Zwei PCR-Primer werden benötigt in a PCR Reaktion (normalerweise); nur einer Sequenzierungsprimer wird zu a. hinzugefügt Sequenzierung Reaktion.
Wie testet man vor diesem Hintergrund PCR-Produkte?
Erkennung und Analyse von PCR-Produkte . Die Produkt von a PCR sollte ein Fragment oder Fragmente von DNA definierter Länge sein. Viele Techniken können verwendet werden, um amplifizierte Sequenzen nachzuweisen (siehe Tabelle). Die einfachste und am häufigsten verwendete Technik ist die Elektrophorese des PCR-Produkt auf einem Agarosegel mit EtBr (Ethidiumbromid).
Warum müssen PCR-Produkte vor der Sequenzierung gereinigt werden?
Reinigung der DNA von a PCR Reaktion ist typischerweise notwendig für Downstream-Verwendung und erleichtert die Entfernung von Enzymen, Nukleotiden, Primern und Pufferkomponenten.
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