Wie funktioniert das Klonen von Gibson?
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Video: Wie funktioniert das Klonen von Gibson?

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Video: Was passiert, wenn du dich klonen lässt? 2024, November
Anonim

Die Gibson Klonen Master Mix besteht aus drei verschiedenen Enzymen in einem einzigen Puffer. Jedes Enzym hat eine spezifische und einzigartige Funktion für die Reaktion: T5-Exonuklease - erzeugt einzelsträngige DNA-3'-Überhänge durch Zurückkauen vom DNA-5'-Ende. Komplementäre DNA-Fragmente können anschließend aneinander anlagern.

Wie funktioniert Gibson in Anbetracht dessen?

Die Gibson Die Assembly®-Methode ist ein Klonierungsverfahren, das die Klonierung von zwei oder mehr Fragmenten ohne die Notwendigkeit eines Restriktionsenzymverdaus oder kompatibler Restriktionsschnittstellen ermöglicht. Stattdessen werden benutzerdefinierte überlappende Enden in die Fragmente eingearbeitet, um das nahtlose Verbinden benachbarter Fragmente zu ermöglichen.

Was ist in ähnlicher Weise im Gibson Assembly Master Mix enthalten? Die Gibson Cloning Master-Mix besteht aus drei verschiedenen Enzymen in einem einzigen Puffer. Jedes Enzym hat eine spezifische und einzigartige Funktion für die Reaktion: T5-Exonuklease - erzeugt einzelsträngige DNA-3'-Überhänge durch Zurückkauen vom DNA-5'-Ende. Komplementäre DNA-Fragmente können anschließend aneinander anlagern.

Wie funktioniert die Golden Gate-Montage auf diese Weise?

Goldenes Tor Klonen oder Golden Gate-Versammlung ist eine molekulare Klonierungsmethode, die es einem Forscher ermöglicht, unter Verwendung von Restriktionsenzymen vom Typ IIs und T4-DNA-Ligase gleichzeitig und gerichtet mehrere DNA-Fragmente zu einem einzigen Stück zusammenzusetzen. Dies Montage ist in vitro durchgeführt.

Wie funktioniert das Klonen von Gateways?

Die GATEWAY-Klonen Die Technologie basiert auf dem ortsspezifischen Rekombinationssystem, das von Phagen 1 verwendet wird, um seine DNA in das E zu integrieren. Die attL- und attR-Stellen, die die inserierte Phagen-DNA umgeben, rekombinieren ortsspezifisch während des Exzisionsereignisses, um die attP-Stelle in Phagen 1 und die attB-Site im E.

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