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Wie wählt man Klone aus?
Wie wählt man Klone aus?

Video: Wie wählt man Klone aus?

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Video: KLONEN - wie geht das? 2024, November
Anonim

Wann wählen ein Klon , vergewissern Sie sich, dass die Wurzeln stark, weiß und eifrig aus dem Nährmedium herausragen. Wenn Wurzeln braun und geschrumpft sind oder auf andere Weise inaktiv erscheinen, legen Sie sie zurück und suchen Sie nach einer besseren.

Außerdem, wie klont man eine einzelne Zelle?

  1. Zählen Sie die Zellen, um ~16.000 Zellen in die erste Vertiefung (A1) einer 96-Well-Platte mit 200 µL Medium zu geben.
  2. 100 µL von A1 mit Zellen entfernen und mit B1 mischen, 3x auf- und abpipettieren, um gut zu mischen, bevor 100 µL entfernt und mit C1 gemischt werden usw.

Und wie wählt man eine Säugetierzellkolonie aus? Legen Sie die Platte unter das Mikroskop, um undifferenzierte gesunde auszuwählen Kolonien . Wähle Kolonien unter Verwendung einer P-20-Pipette, die auf 10 ul eingestellt ist. Sorgfältig wählen ein Kolonie ohne die aufzubrechen Kolonie in Single Zellen , und übertragen Sie es in eine 96-Well-Platte mit Trypsin. Pipettieren Sie ein paar Mal auf und ab, um das zu verteilen Kolonie.

Wie verwendet man dementsprechend einen Klonzylinder?

Verwenden von sterile mittelgroße Pinzette, aufnehmen a Klonzylinder . Drücken Sie vorsichtig auf die flache Unterseite des Zylinder in das glatte Silikonfett geben und mit einer plötzlichen vertikalen Bewegung entfernen. Wenn dies richtig gemacht wird, wird das Fett gleichmäßig auf der Unterseite des Zylinder . Stellen Sie die Zylinder über einer Kolonie.

Wie wählt man Kolonien für stabile Zelllinien aus?

Das Protokoll zur Erzeugung stabiler Zelllinien erfordert mehrere Schritte, wie unten gezeigt:

  1. Generieren Sie eine Abtötungskurve, um die optimale Konzentration des Selektionsantibiotikums zu bestimmen.
  2. Zellen mit dem/den gewünschten Plasmidkonstrukt(en) transfizieren
  3. Wählen und erweitern Sie stabile polyklonale Kolonien.
  4. Identifizieren Sie einzelne Klone durch begrenzte Verdünnung und Expansion.

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