Was passiert, wenn Sie zu viel Restriktionsenzym hinzufügen?
Was passiert, wenn Sie zu viel Restriktionsenzym hinzufügen?

Video: Was passiert, wenn Sie zu viel Restriktionsenzym hinzufügen?

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Video: Gentechnologie 1 DNA-Profilanalyse - Genotyp-Bestimmung (PCR, Restriktionsenzym, Gelelektrophorese) 2024, November
Anonim

Es kann zu einer unvollständigen Verdauung kommen wenn zu viel oder auch wenig Enzym wird genutzt. Die Vorhandensein von Schadstoffen in das DNA-Probe kann hemmen die Enzyme , was auch zu einer unvollständigen Verdauung führt. Etwas Restriktionsenzyme benötigen Cofaktoren für volle Aktivität.

Außerdem, warum werden Restriktionsenzyme zuletzt hinzugefügt?

Die Restriktionsenzym ist normalerweise das letzte Komponente hinzugefügt zu reagieren, um sicherzustellen, dass es keinen extremen Bedingungen ausgesetzt ist. Die zusammengesetzte Reaktion sollte nach gemischt werden Enzym Zusatz. Mischen Sie alle Lösungen, die. enthalten Restriktionsenzyme sanft zu vermeiden Enzym Inaktivierung.

Wie kann außerdem die Restriktionsenzymverdauung verbessert werden? Verwenden Sie nicht mehr als die empfohlenen Enzym Menge (z. B. 10 Einheiten Enzym pro Mikrogramm DNA). Reduzieren Sie die Menge an Enzym bei der Reaktion ggf. Vermeiden Sie eine längere Inkubation des Verdauung Reaktion. Verwenden Sie den empfohlenen Reaktionspuffer.

Wissen Sie auch, warum ein Restriktionsenzym nicht schneiden würde?

Die Vorbereitung der zu spaltenden DNA sollen frei von Verunreinigungen wie Phenol, Chloroform, Alkohol, EDTA, Reinigungsmitteln oder übermäßigen Salzen sein, die alle stören können Restriktionsenzym Aktivität. Wenn ein Inhibitor (oft Salz, EDTA oder Phenol) vorhanden ist, wird die Kontroll-DNA nicht geschnitten nach dem Mischen.

Warum kann die Enzymmenge Sternaktivität verursachen?

Star-Aktivität ist die Lockerung oder Änderung der Spezifität der Einschränkung Enzym vermittelte Spaltung von DNA, die kann treten unter Reaktionsbedingungen auf, die deutlich von den optimalen abweichen Enzym . Star-Aktivität kann passieren wegen der Anwesenheit von Mg2+, wie ist in HindIII zum Beispiel gesehen.

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