Was ist der Zweck der Verwendung von ddNTPs?
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Video: Was ist der Zweck der Verwendung von ddNTPs?

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Video: Deoxynucleotide dNTP vs Dideoxynucleotid ddNTP 2024, März
Anonim

DdNTP bezieht sich auf Didesoxynukleotide Triphosphate, die in der Didesoxy-Methode von Sanger verwendet werden, um DNA-Stränge unterschiedlicher Länge für die DNA-Sequenzierung herzustellen. Dies führt zur Beendigung des DNA-Polymerisations-(oder DNA-Verlängerungs-)Prozesses, da dieser Prozess eine 3'-OH-Gruppe benötigt, um fortzufahren.

Warum werden davon ddNTPs bei der Sequenzierung verwendet?

Didesoxynukleotide sind kettenverlängernde Inhibitoren der DNA-Polymerase, Gebraucht in der Sanger-Methode für DNA Sequenzierung . Die Didesoxyribonukleotide haben keine 3'-Hydroxylgruppe, daher kann keine weitere Kettenverlängerung auftreten, sobald sich dieses Didesoxynukleotid an der Kette befindet. Dies kann zur Beendigung der DNA führen Reihenfolge.

Hängen ddNTPs auf ähnliche Weise an dNTPs an? Eine oder mehrere der dNTPs sind radioaktiv markiert, um die Replikationsprodukte sichtbar zu machen. Schließlich erhält jedes Röhrchen eines von vier speziellen Nukleotiden namens Didesoxynukleotide ( ddNTPs ). Sobald die DNA-Polymerase jedoch eingebaut ist, kann sie die Kette nicht weiter verlängern, da sie ein 3'-OH zu benötigt anfügen zum nächsten Nukleotid.

Ähnlich kann man fragen, wie ddNTPs eine Sequenzierungsreaktion stoppen?

Wenn in kleinen Mengen vorhanden in Sequenzierungsreaktionen , Didesoxyribonukleosidtriphosphate ( ddNTPs ) beenden die Sequenzierungsreaktion an verschiedenen Positionen in den wachsenden DNA-Strängen. ddNTPs stoppen eine Sequenzierungsreaktion weil sie: DNA-Polymerase vom Matrizenstrang abfallen lassen. C.

Welche Technik mit Didesoxynukleotiden könnte verwendet werden?

Sanger-Sequenzierung ist a Methode der DNA-Sequenzierung basierend auf dem selektiven Einbau kettenabbrechender Didesoxynukleotide durch DNA-Polymerase während der in vitro-DNA-Replikation. Es wurde 1977 von Frederick Sanger und Kollegen entwickelt und war das am weitesten verbreitete Gebraucht Sequenzierung Methode seit etwa 40 Jahren.

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