Warum würde ein Restriktionsenzym nicht schneiden?
Warum würde ein Restriktionsenzym nicht schneiden?

Video: Warum würde ein Restriktionsenzym nicht schneiden?

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Video: Restriktionsenzyme & DNA-Ligasen einfach erklärt - Werkzeuge, Methode, Grundlagen der Gentechnik 1 2024, Kann
Anonim

Es kann verschiedene Gründe geben, warum Ihr Restriktionsenzym schneidet nicht die DNA, wie in diesem Video besprochen. Die Vorbereitung der zu spaltenden DNA sollen frei von Verunreinigungen wie Phenol, Chloroform, Alkohol, EDTA, Reinigungsmitteln oder übermäßigen Salzen sein, die alle stören können Restriktionsenzym Aktivität.

Warum schneiden Restriktionsenzyme in dieser Hinsicht keine bakterielle DNA?

Bakterien verfügen über Restriktionsenzyme , auch genannt Restriktionsendonukleasen , welcher schneiden Doppelstrang DNA an bestimmten Stellen in Fragmente. Interessant, Restriktionsenzyme spalte nicht ihre eigenen DNA . Bakterien ihre eigenen verhindern DNA von abhacken durch Restriktionsenzym durch Methylierung der Beschränkung Websites.

Man kann sich auch fragen, wo schneiden Restriktionsenzyme? Restriktionsenzym Typen im Allgemeinen, Typ I Enzyme schneiden DNA an Orten, die von der Erkennungssequenz entfernt sind; Typ II schneiden DNA innerhalb oder nahe der Erkennungssequenz; Typ III schneiden DNA-nahe Erkennungssequenzen; und Typ IV spaltet methylierte DNA.

Ebenso wird gefragt, was passiert, wenn Sie zu viel Restriktionsenzym hinzufügen?

Es kann zu einer unvollständigen Verdauung kommen wenn zu viel oder auch wenig Enzym wird genutzt. Die Vorhandensein von Schadstoffen in das DNA-Probe kann hemmen die Enzyme , was auch zu einer unvollständigen Verdauung führt. Etwas Restriktionsenzyme benötigen Cofaktoren für volle Aktivität.

Warum funktioniert mein Restriktions-Digest nicht?

Unvollständig oder nein Verdauung aufgrund einer durch DNA-Methylierung blockierten Enzymaktivität. Wenn Ihr Enzym aktiv ist und verdaut die Kontroll-DNA und das Reaktion ist unter optimalen Bedingungen aufgebaut, aber man sieht trotzdem Themen mit Verdauung , es könnte daran liegen das Enzym wird durch Methylierung von. gehemmt das Template-DNA.

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