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Video: Warum müssen PCR-Produkte vor der Sequenzierung gereinigt werden?
2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2023-12-16 00:12
Überprüfung der gewünschten Produkt ist notwendig , was die Bestätigung eines Mangels an unspezifischen Produkte und Primerdimere. Sauber -up der Reaktionsmischung ist auch notwendig um nicht eingebaute Primer und dNTPs zu entfernen, die nachfolgende Reaktionen stören und zu einer unlesbaren Sequenz führen können.
Außerdem, warum ist es notwendig, PCR-Produkte zu reinigen?
Du musst Reinigung von PCR-Produkten um ungenutzte Primer, Nukleotide und Enzyme loszuwerden, um den Ligationserfolg zu optimieren, wodurch die Produkt von PCR . Zu reinigen das PCR-Produkte , wird Größenausschlusschromatographie verwendet.
Man kann sich auch fragen, sollten Sie PCR-Produkte vor dem Restriktionsendonuklease-Verdau reinigen? Die Mehrheit von Beschränkung Enzyme sind aktiv in PCR Puffer. Für Klonanwendungen, Reinigung von PCR-Produkte vor dem Verdau ist notwendig um die aktive thermophile DNA-Polymerase zu entfernen, die in der PCR Mischung. DNA-Polymerasen können die Enden der gespaltenen DNA verändern und die Ligationsausbeute verringern.
Die Leute fragen auch, wie man PCR-Produkte für die Sequenzierung vorbereitet?
Direkte Sequenzierung von PCR-Produkten
- Stellen Sie sicher, dass Sie das richtige Fragment amplifiziert haben.
- Sie müssen alle restlichen PCR-Primer und nicht eingebauten Nukleotide entfernen.
- Wenn die PCR-Primer auch die Sequenzierungsprimer sind, stellen Sie sicher, dass sie unseren Bedingungen entsprechen.
- Überkonzentrieren Sie die Probe nicht!
Können Sie ein PCR-Produkt sequenzieren?
Direkte Sequenzierung von PCR-Produkte . Sequenzierung verwendet nur einer Primer anstelle der beiden verwendeten in PCR . Wenn Sie tun nicht beide Primer entfernen, Du wirst nimm zwei Sequenzen überlagert, die nicht lesbar sind. Es ist in Ordnung, a. zu verwenden PCR Grundierung für Sequenzierung solange es unseren Bedingungen entspricht.
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