Video: Wie funktioniert die Sanger-DNA-Sequenzierung?
2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2023-12-16 00:12
Sanger-Sequenzierung führt zur Bildung von Verlängerungsprodukten unterschiedlicher Länge, die mit Didesoxynukleotiden am 3'-Ende terminiert sind. Die Verlängerungsprodukte werden dann durch Kapillarelektrophorese oder CE getrennt. Die Moleküle werden durch einen elektrischen Strom in eine lange, mit einem Gelpolymer gefüllte Glaskapillare injiziert.
Was ist also die Sanger-Methode zur DNA-Sequenzierung?
Sanger-Sequenzierung , auch als Kettenabbruch bekannt Methode , ist eine Technik für DNA-Sequenzierung basierend auf dem selektiven Einbau von kettenabbrechenden Didesoxynukleotiden (ddNTPs) durch DNA Polymerase während in vitro DNA Reproduzieren. Es wurde von Frederick entwickelt Sänger und Kollegen 1977.
Und wie funktioniert die Kettenabbruchsequenzierung? Sänger-DNA Sequenzierung ist auch als bekannt Kette - Beendigung Methode von Sequenzierung . ddNTPs führen zu Beendigung des DNA-Strangs, da ddNTPs die 3'-OH-Gruppe fehlt, die für die Bildung von Phosphodiesterbindungen zwischen Nukleotiden erforderlich ist. Ohne diese Bindung ist die Kette der gebildeten Nukleotide ist gekündigt.
Warum machen wir Sanger-Sequenzierung?
Sanger-Sequenzierung ist ein Methode von DNA-Sequenzierung basierend auf dem selektiven Einbau kettenabbrechender Didesoxynukleotide durch DNA Polymerase während in vitro DNA Reproduzieren. Es hat immer noch den Vorteil gegenüber Short-Read Sequenzierung Technologien (wie Illumina), die es kann produzieren DNA-Sequenz Reads von > 500 Nukleotiden.
Ist die Sanger-Sequenzierung genau?
Sanger-Sequenzierung mit 99,99% Richtigkeit ist der „Goldstandard“für die klinische Forschung Sequenzierung . Allerdings werden neuere NGS-Technologien aufgrund ihrer höheren Durchsatzfähigkeiten und niedrigeren Kosten pro Probe auch in klinischen Forschungslabors gebräuchlich.
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